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Bimatoprost, prostamide attività e convenzionale di drenaggio astratto Scopo: Nonostante la somiglianza strutturale con prostaglandina F 2 & # x003b1; . l'agente ipotensivo oculare, bimatoprost (Lumigan), mostra pharmacology unico in vitro ed attività funzionale in vivo. Purtroppo, i precisi meccanismi che sono alla base dell'impatto distintivo di bimatoprost sulle dinamiche acquose umorismo non sono chiare. Lo scopo di questo studio è stato quello di studiare gli effetti di bimatoprost e un antagonista selettivo prostamide-romanzo, AGN 211334, il drenaggio convenzionale umana. metodi: Due sistemi modello sono stati impiegati per testare le conseguenze di bimatoprost e / o AGN 211334 trattamento sulla drenaggio convenzionale. segmenti anteriore umana in coltura di organi sono stati perfusi ad un flusso costante di 2,5 & # x003bc; l / min, mentre la pressione è stata registrata in modo continuo. Dopo strutture linea di base stabile sono stati stabiliti, i segmenti sono stati trattati con la droga (s) e la pressione è stata monitorata per altri tre giorni. Parallelamente, sono stati valutati farmaco (s) effetti sulla conducibilità idraulica di monostrati di cellule trabecolato umano (TM). proprietà farmacologiche di AGN 211334 sono stati caratterizzati usando isolati preparati felino Iris in cultura d'organo e eterologhi espressi recettori accoppiati a proteine G in vitro. risultati: Bimatoprost è aumentata facilità di deflusso da una media di 40 & # x000b1; 10% entro 48 ore di trattamento (n = 10, p & # x0003c; 0.001). La preincubazione o coincubation con AGN 211334 smussati in modo significativo gli effetti bimatoprost rispettivamente il 95% o 43%,. Risultati simili sono stati ottenuti in esperimenti di coltura cellulare dove bimatoprost aumentata conduttività idraulica monostrati cellulari TM del 78 & # x000b1; 25%. Il pretrattamento con AGN 211334 completamente bloccato effetti bimatoprost mentre coincubation diminuita effetti bimatoprost in media del 74%. È interessante notare che, in entrambi i modelli AGN 211.334 solo diminuita in modo significativo il flusso del fluido attraverso trabecolare tessuti / cellule. Conclusioni: I nostri risultati indicano che bimatoprost interagisce con un recettore prostamide nel trabecolato per aumentare la facilità di deflusso. Parole chiave: umore acqueo, la cultura d'organo, prostaglandine, canale di Schlemm, trabecolato introduzione Il glaucoma è una delle principali cause di cecità degli adulti, che interessano circa 70 milione di persone in tutto il mondo 1. 2. La forma più comune, glaucoma primario ad angolo aperto è caratterizzato da una diminuzione deflusso attraverso la via di drenaggio convenzionale che provoca ipertensione oculare 3 - 5. elevata pressione intraoculare (IOP) nel corso del tempo sembra contribuire alla cecità, aumentando sollecitazioni meccaniche sulla testa del nervo ottico, causando danni irreversibili alla retina assoni delle cellule gangliari 6. 7. A causa della loro efficacia nel ridurre la IOP, prostaglandine (PG) composti sono stati ampiamente utilizzati nella pratica clinica per il trattamento di ipertensione oculare. Il primo mimetica PG utilizzato nella gestione di successo della IOP era latanoprost, un sintetico PGF 2 & # x003b1; analogico. Latanoprost è relativamente inattivo fino suo estere isopropilico viene idrolizzato per creare un acido libero biologicamente attivo che funziona quindi come un agonista del recettore FP 8. A causa della efficacia di latanoprost, due mimetici aggiuntivi, travoprost e Unoprostone, sono stati sviluppati per il trattamento di oculari ipertensione. L'attività ipotensiva di questi tre F 2 & # x003b1; analoghi sembra essere compiuta da rimodellamento a lungo termine della matrice exracellular nel corpo ciliare 9. 10. Pertanto, la IOP abbassamento PGs appare sostanzialmente dovuto ad una maggiore uveosclerale (convenzionale) efflusso 11. Recentemente, un relativo composto di PG, una prostamide chiamato bimatoprost è stato introdotto, e ha dimostrato di essere un efficace agenti ipotensivi oculari negli studi di pazienti 12 - 14. Bimatoprost è molecola sintetica derivata dalla anandamide che ha somiglianza strutturale e farmacologica per PGF 2 & # x003b1; etanolamide. Mentre strutturalmente simile, le prove dimostrano che bimatoprost possiede proprietà farmacologiche uniche e farmacocinetiche, distinte da noti agonisti dei recettori FP. Ad esempio, 1000 volte più alte concentrazioni di bimatoprost di PGF 2 e # x003b1; sono tenuti a indurre [Ca 2 +] i mobilitazione in cellule che esprimono i recettori o cellule che esprimono i recettori eterologhi FP umani 14. 15. Inoltre, studi farmacologici clinici con bimatoprost rivelano che, a differenza di latanoprost, bimatoprost non viene significativamente metabolizzato a causa di FP endogeni l'assenza di prodotto di idrolisi acido libero in circolazione sistemica dopo somministrazione topica oculare a volontari umani 16. 17. l'idrolisi di bimatoprost a un acido libero avviene a tasso molto basso (& # x0003c; 1% per ora), quando esposti ad una serie di oculare e tessuti non-oculari in tre studi 14. 16. 18 e ad un tasso più elevato in altri due studi 19. 20. infine, bimatoprost non riesce ad attivare oltre 100 bersagli farmacologici noti, tra cui una varietà di recettori che possono essere coinvolti nella regolazione IOP 14. Purtroppo, perché un recettore prostamide non è stato clonato, la loro esistenza di si basa attualmente su criteri farmacologici. Il meccanismo con cui prostamidi differiscono da PG-F 2 e # x003b1; agonisti nella loro efficacia nei confronti di regolazione della pressione intraoculare è ancora sconosciuta. Un recente studio ha mostrato che il trattamento bimatoprost inumidito aumento IOP causa potabile in un gruppo di pazienti affetti da glaucoma, suggerendo un effetto sulla, via drenaggio convenzionale sensibile alla pressione 12. In recenti studi clinici, bimatoprost abbassato successo IOP in pazienti refrattari al latanoprost terapia suggerendo differenze nel meccanismo di azione di prostamide e PGF 2 e # x003b1; recettori agonisti 13. 21. È interessante notare che, oltre a cambiamenti osservati nella matrice extracellulare del corpo ciliare, scimmie bimatoprost trattati visualizzati cambiamenti morfologici nel loro percorso di drenaggio convenzionale dopo un anno di trattamento 22. Nel loro insieme, questi dati suggeriscono che bimatoprost ha un'attività nel tratto drenaggio convenzionale. Per testare specificamente gli effetti di bimatoprost sul drenaggio convenzionale, abbiamo utilizzato il modello di perfusione segmento anteriore, che conserva l'architettura del trabecolato (TM) e consente la verifica della funzione deflusso convenzionale separatamente dalla funzione convenzionale. Per esaminare il ruolo dei recettori prostamide in controllo di drenaggio convenzionale, abbiamo testato la capacità di un antagonista prostamide selettivo di seconda generazione, AGN 211334, per bloccare gli effetti bimatoprost. AGN 211334 è l'ultimo residuo della serie ed è più di 10 volte più potente antagonista prostamide prototipo AGN 204.396 23. La presenza delle attività del recettore prostamide nelle cellule umane TM è stato testato registrando variazioni di conduttività idraulica delle colture primarie di cellule TM monostrati su bimatoprost / AGN 211334 trattamenti. I risultati mostrano che bimatoprost interagisce con i recettori sulle cellule prostamide TM per aumentare facilità di deflusso in situ e conducibilità idraulica in vitro. metodi materiale Bimatoprost è stato sintetizzato da Allergan Inc. (Irvine, CA). AGN 211334 è stato progettato e sintetizzato da selcia Ltd (Ongar, Inghilterra). Le soluzioni madre sono state preparate sciogliendo la droga in etanolo dando una concentrazione magazzino di 10 & # x02212; 3 M per bimatoprost e 3 & # x000d7; 10 & # x02212; 3 M per AGN 211334 che sono stati tenuti a & # x02212; 20 & # x000b0; C fino al momento dell'uso. Le soluzioni madre di isoproterenolo (10 & # x02212, 2 M, Calbiochem, La Jolla, CA) sono stati fatti freschi nel mezzo di perfusione. Le soluzioni finali sono stati preparati freschi diluendo soluzioni di riserva nel mezzo di perfusione immediatamente prima di scambi da camera. Segmento Anteriore Perfusion Modello Post Mortem occhi umani sono stati ottenuti fresco dal National Disease Research Interchange (Philadelphia, PA) e donatore di rete di Arizona (Phoenix, AZ). Gli occhi erano privi di qualsiasi nota malattia oculare, e sono stati conservati in camere umide a 4 & # x000b0; C fino sezionato. Preparazione e perfusione dei segmenti anteriori sono stati eseguiti esattamente come descritto in precedenza nel nostro laboratorio; modificando leggermente descrizioni originali di metodi di perfusione 24 - 27. Dopo la dissezione e il montaggio in camere di coltura, segmenti anteriori sono stati perfusi con un flusso costante di 2,5 & # x003bc; l / min con Modified mezzo di Eagle Dulbecco (DMEM) cui antibiotici (penicillina 100 U / ml, streptomicina 100 & # x003bc; g / ml Sigma-Aldrich), furono aggiunti albumina di siero bovino (BSA) 25 mg / dl e siero fetale bovino 1% (FBS). I segmenti anteriori sono stati coltivati a 37 & # x000b0; C in aria umidificata contenente il 5% di CO 2. pressioni Intrachamber sono stati continuamente registrati con trasduttori di pressione dedicati che interfacciato con un registratore dei dati digitali e computer. Quando sono stati raggiunti strutture linea di base stabile (in genere dopo 2-4 giorni di perfusione), medie segmenti anteriori è stato scambiato in circa 10 mmHg (13.6 cm H 2 0) di pressione costante con terreno contenente 1 & # x003bc; M bimatoprost. Abbiamo scelto questa concentrazione sulla base delle concentrazioni del corpo ciliare e del tessuto dell'iride di bimatoprost osservati in via topica dosate primati non umani 28 e da studi preliminari in cui abbiamo effettuato esposizioni sequenziale dose-risposta (10 NM-1 & # x003bc; M) e ottenuto coerente solo risultati a 1 e # x003bc; M (non mostrato). segmenti controlaterale sono stati scambiati con il 30 & # x003bc; M AGN 211334 più 1 & # x003bc; M bimatoprost (protocollo 1) o 30 & # x003bc; M AGN 211334 da solo e poi sono stati costantemente perfuso con una soluzione di droga. segmenti anteriori che, inizialmente, hanno ricevuto AGN211334 sono stati scambiati con terreno contenente 30 & # x003bc; M AGN 211.334 più 1 & # x003bc; M bimatoprost dopo 24 ore di pre-trattamento (protocollo 2) e quindi erano costantemente perfuse con una soluzione di droga. Quarantotto ore dopo il trattamento iniziale di droga, di media da coppie di segmenti anteriori è stato scambiato con terreno fresco senza farmaco (s), ed i segmenti sono stati perfusi per altri 3-4 giorni. Spessore corneale centrale L'SP-100 Handy Pachymeter (Tomey Corporation, Giappone) è stato utilizzato per ottenere lo spessore corneale centrale (CCT) misure di interi globi all'arrivo ai nostri segmenti di laboratorio e anteriori durante la perfusione 27. Dopo le misurazioni iniziali sui globi interi, TDC è stata misurata sulla anteriore segmenti di 2 ore dopo l'inizio della perfusione, e ogni 24 a 48 ore dopo 27. punti dati erano la media di tre letture effettuate in sequenza. Se una delle letture era significativamente diverso dagli altri due (& # x0003e; 100 & # x003bc; m), due ulteriori letture sono state effettuate, e sia la più alta e la più bassa sono state scartate. La pendenza è stata calcolata dalle misurazioni CCT ottenuti dopo l'inizio della perfusione del giorno della prima del trattamento farmacologico (s). Analisi morfologica Alla fine della perfusione, medie camera anteriore è stato scambiato con 3% paraformaldeide (PFA) in PBS (pH 7,4) sotto una pressione di 10 mmHg. Dopo perfusione 2,5 & # x003bc; lt / min per 1 ora con PFA, segmenti anteriori sono stati rimossi dalle camere di coltura e diversi cunei (& # x0223c, 2 mm di larghezza) contenenti tessuti deflusso stati tagliati da ciascuno dei quattro quadranti utilizzando 15 # bisturi e furono conservati nel 2% PFA. cunei rappresentativi di ogni quadrante stati incorporati in plastica di Spurr secondo i metodi standard e colorate con blu di toluidina 26. sagittalmente orientato 0,5 & # x003bc; m sezioni sono state viste al microscopio ottico utilizzando un microscopio verticale Olympus BH-2 ad ingrandimenti di 200X e 400X. Tutte le sezioni sono state valutate in modo mascherato da due osservatori secondo uno schema di classificazione che è stato descritto in precedenza 27. 0 = No cellule del trabecolato (TM) o solo poche cellule gonfie; interno interruzione parete (pause, altri danni) presente 1 = solo poche cellule nel TM, tipicamente nel tessuto juxtacanalicular (JCT), ma le celle esistenti mostrano poco o nessun gonfiore, parete interna intatta 2 = JCT ben popolato con le cellule; Trame corneosclerale e uveali contengono pochi o nessun cellule; parete interna intatta 3 = JCT e la maggior parte del reticolo corneosclerale riempita di cellule; gran parte delle cellule guardare bene (nessun gonfiore); parete interna intatta 4 = trabecolato sembra essenzialmente normale; le cellule sono presenti in tutto il JCT e reticolo corneosclerale (uveale mesh non considerata); parete interna intatta. Il voto finale riportati per ciascun segmento anteriore è stata calcolata la media dei punteggi di tutti e quattro i quadranti in un segmento anteriore da due osservatori (Tabella 2). Caratteristiche di occhi donatore umano Coltura cellulare Tre ceppi precedentemente caratterizzate di cellule trabecolato umane (HTM 61, 86, e 89) sono stati utilizzati nello studio attuali 29. 30. cellule HTM sono state coltivate in Modified Eagle Medium di Dulbecco (DMEM bassa di glucosio; Gibco, Carlsbad, CA), e supplementato con 10% siero fetale bovino (Gemini, Woodland, CA) e 100 U / ml di penicillina, 0,1 mg / ml di streptomicina, e 0,29 mg / ml di glutammina (Invitrogen, San Diego, CA) e cresciuto in aria umidificata contenente il 5% di CO 2 a 37 & # x000b0; C. Le cellule (1 & # x000d7; 10 5) sono state seminate su filtri a membrana in policarbonato (coltura di tessuti trattati, diametro 12mm 0.4 & # x003bc; dimensione dei pori m; Corning Incorporated, Corning, NY) a confluenza e ha permesso 9-12 giorni per i monostrati di maturare prima sperimentazione. perfusione cellulari Filtri con cellule sono state poste in una camera di Ussing tipo riempito con DMEM HEPES-buffered (25mM HEPES, pH 7,4). La camera, tubi, e il serbatoio sono stati delicatamente pieni di DMEM + HEPES e le cellule sono stati autorizzati a acclimatare per 30 minuti a 37 & # x000b0; C senza gradiente di pressione. Per iniziare l'esperimento, il serbatoio è stato portato a 13,6 cm al di sopra della linea mediana delle celle filtranti contenente (dando un differenziale di pressione di 10 mmHg attraverso le cellule) e lasciata perfusione per 30 minuti a 37 & # x000b0; C, dando misurazione di riferimento iniziale. Successivamente, la camera è stata scambiata con mezzo fresco contenente 1 e # x003bc; M Isoproterenol, 1 e # x003bc; M Bimatoprost, e / o 30 e # x003bc; M AGN 211334. I monostrati cellulari sono stati più esposte ad una testa di pressione di 10 mm Hg per 30 minuti e conducibilità idraulica è stato registrato 31. 32. gli esperimenti sono stati conclusi rimuovendo i filtri dalla camera, risciacquo cellule due volte in PBS e fissare le cellule con 4% paraformaldeide in PBS. Per l'inserimento dei dati, misurazioni iniziali conduttività idraulica (prima e dopo lo scambio finto) devono essere stabili, (cioè entro 5% di ogni altro) e nel giro di 1,5-6 & # x003bc; L / min / mmHg / cm 2 tale per cui variazioni indotte da farmaci rispetto al basale rimarrebbero nella gamma di rilevamento per il trasduttore di forza di spostamento. Modello Feline Iris Contrazione tessuti iris Feline dello sfintere preparato come descritto in precedenza sono stati montati verticalmente sotto 50 a 100 mg di tensione in una camicia 10 ml bagno per organi 33. tensione muscolare liscia del isolato dell'iride sfintere è stata misurata in isometria con trasduttori di forza di spostamento (Erba FT-03) e registrato su un poligrafo Grass (Modello 7). I bagni organi contenevano soluzione Krebs 'mantenuta a 37 & # x000b0; C da uno scambiatore di calore e pompa di circolazione. La soluzione di Krebs '(118,0 mM NaCl, 4,7 mm KCl, 1,2 mm KH 2 PO 4. 1,9 mm CaCl 2. 1.18 mM MgSO 4. 25,0 mm NaHCO 3. glucosio 11.7 mm e 0,001 mm indometacina) è stato gasati con il 95% O 2 . 5% CO 2 per dare un pH di 7,4. I tessuti sono stati autorizzati 60 min di stabilizzare prima di iniziare ogni esperimento. Gli esperimenti iris felini sono stati progettati in modo che un confronto diretto a quattro vie per antagonista contro prostamide, veicolo contro prostamide, antagonista contro corrispondenti PG, e il veicolo contro il corrispondente PG è stato fornito in preparazioni di tessuto ottenuti da un singolo animale. Una curva dose-risposta cumulativo di agonista è stata ottenuta in ogni tessuto. Vehicle (etanolo) ed antagonista (AGN 211.334) sono stati dati 30 minuti prima che le curve dose-risposta agonista stati costruiti. La risposta a PGF 2 & # x003b1; 10 e # x02212; 7 M è stata determinata all'inizio e alla fine di ogni curva dose-risposta, con adeguate wash-out, e le risposte sono state calcolate come% di questa contrazione riferimento. Ca 2+ Studi segnale sul umano ricombinante prostanoidi Recettori L'uso di chimerici cDNA della proteina G (prostanoidi DP, EP 1. EP 2. EP 4. FP, IP e TP) stabilmente espresso in cellule HEK-293 EBNA permesso risposte a G s e G i recettori accoppiati prostanoidi da misurare come Ca2 + segnale, come descritto in precedenza 33. Ca 2+ studi di segnalazione sono stati effettuati utilizzando un (fluorimetrico lettore di piastre di imaging) strumento FLIPR. Le cellule furono piastrate ad una densità di 5 & # x000d7; 10 4 cellule / pozzetto in Biocoat poli-D-lisina rivestito, muro nero, chiare fondo 96 pozzetti (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ) e ha permesso di collegare durante la notte in termostato a 37 & # x000b0; C. Le cellule sono state poi lavate due volte con HBSS-tampone HEPES (soluzione salina bilanciata Hanks 'senza bicarbonato e rosso fenolo, 20 mM HEPES, pH 7,4) mediante una piastra rondella Denley Cellwash (Labsystems, Franklin, MA). Dopo 45-60 minuti di colorante di caricamento nel buio utilizzando il Ca 2+ dye sensitive Fluo-04:00, ad una concentrazione finale di 2 e # x000d7; 10 & # x02212; 6 M, le piastre sono state lavate 4 volte con tampone HBSS-HEPES per rimuovere l'eccesso di colorante e lasciando 100 & # x003bc; l di tampone in ciascun pozzetto. Le piastre sono state poi poste in strumento FLIPR e lasciato equilibrare a 37 & # x000b0; C. Le soluzioni composte sono state aggiunte in un 50 & # x003bc; l volume ad ogni bene per dare la concentrazione finale desiderata. Le cellule erano eccitato con un laser ad argon a 488 nm ed emissione è stata misurata attraverso un filtro per le emissioni larghezza di banda 510-570 nm (FLIPR, Molecular Devices, Sunnyvale, CA). L'aumento di picco nella fluorescenza è stata registrata per ciascun pozzetto. Il disegno sperimentale per gli studi FLIPR era la seguente. Su ogni piatto, quattro pozzi ciascuno servito come negativo (tampone HBSS-HEPES) e controlli positivi (agonisti di serie:.. DP = BW 245C, EP 1 - EP 4 = PGE 2 FP = PGF 2 & # x003b1; IP = carbaprostacyclin TP = U-46619). La variazione picco di fluorescenza in ciascun farmaco ben contenente stato espresso rispetto ai controlli. Per ottenere curve concentrazione-risposta, i composti sono stati testati in duplicato in ogni piatto sulla gamma di concentrazione desiderata. Ogni composto è stato testato su almeno 3 piatti separati utilizzando cellule da diversi passaggi a dare n = 3. Analisi statistica effetti della droga sono stati espressi come percentuale di aumento o diminuzione della facilità di deflusso (o conducibilità idraulica) dopo la somministrazione del farmaco (Cd) rispetto al basale (Co) e calcolate come / Co & # x000d7 (Cd-Co); 100%. Un paired t-test a due campioni è stata effettuata per l'analisi statistica. P valori inferiori a 0,01 sono stati considerati come statisticamente significativo. Per perfusioni segmento anteriore, il Co è la media della struttura che stabile per almeno 24 ore prima di ogni trattamento. Cd era la struttura media del secondo 12 ore dopo la ogni giorno di trattamento. impianto Washout era l'impianto medio delle seconde 12 ore dopo washout. I valori sono stati espressi come media & # x000b1; SEM. risultati AGN 211334 blocco in Feline Iris Le strutture di bimatoprost, un antagonista del prostamide AGN 211334, prostamide F 2 & # x003b1; e PGF 2 & # x003b1; sono mostrati in figura 1A. Per esaminare la specificità di AGN 211334 come un antagonista, effetti di AGN 211334 (30 & # x003bc; M) sulle contrazioni prodotte da bimatoprost, prostamide F 2 & # x003b1; e PG-F 2 & # x003b1; sono mostrati in figura 1B, 1C e 1D. AGN 211334 prodotto un chiaro spostamento a destra della curva bimatoprost concentrazione-risposta (10 & # x02212; 10 M-10 & # x02212; 5 M, figura 1B) e un chiaro spostamento verso destra della prostamide F 2 & # x003b1; curva concentrazione-risposta (10 & # x02212; 9 M-10 & # x02212; 5 M, figura 1C) pure, ma nessun significativo spostamento della x003b1 PGF 2 & #; curva concentrazione-risposta (figura 1D) nelle preparazioni iris felini. Specificità dell'antagonista prostamide, AGN 211334 AGN 211334 blocco in umana ricombinante prostanoidi recettori. Gli effetti di un 30 & # x003bc, M concentrazione di AGN 211334 su Ca 2+ segnali associati con ricombinante attivazione del recettore umano prostanoide sono riassunti nella Tabella 1. L'antagonismo non era evidente a DP, EP 1. EP 2. EP 3. PE 4. FP o recettori IP ma AGN 211334 è stato un antagonista del recettore efficace TP (K = b 16 Nm). Questi dati vengono confrontati in tabella 1 con il valore b K ottenuto per AGN 211334 vs. prostamide F 2 & # x003b1; nell'iride feline isolate, come precedentemente descritto (42). attività antagonista di AGN 211334 recettori prostamide nell'iride felini e recettori ricombinanti umani prostanoidi. Bimatoprost e AGN211334 Effetti sulla Deflusso Struttura segmenti anteriore umana perfusione nella coltura di organi sono stati utilizzati per valutare gli effetti della bimatoprost e AGN211334 sulla funzione deflusso convenzionale. Venti segmenti anteriori da 11 donatori sono stati esaminati. Età dei donatori variava 49-91 (media: 67.5 & # x000b1; 3,5 anni), il tempo medio dalla morte alla enucleazione è stata del 6,3 & # x000b1; 1.1 ore, mentre il tempo medio dalla morte alla perfusione era 34,6 & # x000b1; 1,6 ore (Tabella 2). Per esaminare gli effetti di bimatoprost sul drenaggio convenzionale, due paradigmi sperimentali sono stati utilizzati: Nella prima, un segmento anteriore da una coppia di strutture di deflusso stabili è stato trattato con bimatoprost, mentre il segmento controlaterale è stato esposto a bimatoprost (1 e # x003bc; M) più AGN 211334 (30 & # x003bc; M). Nel secondo protocollo, un segmento della coppia è stato trattato con bimatoprost, mentre l'altro è stato prima pretrattati con AGN 211334 e 24 ore più tardi è stato trattato con bimatoprost più AGN 211334. Esempi di tracce da segmenti anteriori che sono stati sottoposti a due protocolli sono mostrati in figura 2. in entrambe le tracce effetti bimatoprost sono immediati e costante nei due giorni di esposizione (tracce nere). Su washout di bimatoprost con mezzo di perfusione fresco, abbiamo osservato due tipi di risposte, né impianto è stabilizzato a un livello superiore rispetto al basale originale (pannello B, n = 5) o ha continuato ad aumentare (pannello A, n = 5), ma ad un altro tasso graduale. Abbiamo confrontato la pendenza di aumento impianto durante il trattamento bimatoprost (0,03 & # x000b1; 0,01) contro pendenza di aumento dopo il lavaggio (0,01 & # x000b1; 0,01), e abbiamo trovato loro di essere diverso (p = 0,02). Al contrario, facilità di deflusso di tutti i segmenti anteriori trattati con bimatoprost e AGN 211334 contemporaneamente aumentato a un tasso inferiore rispetto al trattamento bimatoprost da solo (pannello A). facilità di deflusso di tutti i segmenti anteriori pre trattata con AGN 211334 prima di co-trattamento con bimatoprost è rimasto simile a siglare le misurazioni di base (pannello B). tracce facilità di coppie di segmenti anteriore umana trattati con bimatoprost Una sintesi delle risposte facilità di deflusso a trattamenti farmacologici sono mostrati in figura 3. Dieci segmenti anteriori sono stati esposti a bimatoprost con una media di partenza impianto (di base) di 0,18 & # x000b1; 0.04 e # x003bc; l / min / mm Hg (Tabella 3). Quando espressi come variazione percentuale rispetto al basale, l'aumento medio impianto per i 10 segmenti è stata del 14% dopo 24 ore (p = 0.001), e il 40% dopo 48 ore (p = 0.0002). Dopo washout, facilità di deflusso ha continuato ad aumentare, ma ad un ritmo più lento; raggiungendo un massimo del 49% settantadue ore dopo l'esposizione iniziale al bimatoprost (p = 0,001). L'impianto a partire media di 4 segmenti anteriori controlaterale co-trattati con AGN 211334 più bimatoprost era 0,24 & # x000b1; 0.09 e # x003bc; l / min / mm Hg (Tabella 3). L'aumento medio della struttura è stata del 6% dopo 24 ore (p = 0.02) e il 23% dopo 48 ore (p = 0.03). A seguito di washout, facilità di deflusso in media era del 17% superiore a quello di base originale, ma non significativamente diverso (p = 0.3). L'impianto di media al basale deflusso di 6 compagni di segmenti pre-trattati con AGN 211334 da solo era 0,15 & # x000b1; 0.02 e # x003bc; l / min / mm Hg (Tabella 3). Al momento l'esposizione dei tessuti trabecolari per AGN 211334, facilità di deflusso è diminuito del 4% dopo 24 ore (p = 0,04). L'aggiunta di bimatoprost a segmenti AGN-pretrattati aumentata facilità di deflusso del 2% rispetto ai valori basali iniziale (p = 0.3). A seguito di uno scambio da camera con terreno fresco, impianto di media deflusso in segmenti AGN-pretrattati misurata inferiore 1% rispetto al basale originale (p = 0.5). Mostrato in figura 4 sono immagini rappresentative di sezioni istologiche presi da una coppia segmento anteriore che è stato trattato con bimatoprost (pannello A) o bimatoprost dopo pre-trattamento con AGN 211334 (pannello B). Sintesi dei risultati che mostrano effetti di bimatoprost e / o AGN 211334 trattamento in facilità di deflusso dei segmenti anteriore umana in coltura d'organo
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